Loi de Beer-Lambert
ThéorèmeA = ε × l × c
A = absorbance (sans unité, 0 ≤ A ≤ 2 en pratique)
ε = coefficient d'absorption molaire (L·mol⁻¹·cm⁻¹) — spécifique au soluté et à λ
l = longueur du trajet optique dans la cuve (cm)
c = concentration molaire (mol/L)
ABSORBANCE :
A = log(I₀/I) = −log(T)
T = I/I₀ = transmittance (0 à 1)
DOMAINE DE VALIDITÉ :
• Solutions diluées (c < 0,01 mol/L)
• Lumière monochromatique (λ fixée)
• Pas d'association ou décomposition du soluté
APPLICATIONS MÉDICALES :
• Dosage glycémie, créatinine, bilirubine
• Numération des globules rouges
• Dosage de l'hémoglobine glyquée (HbA1c)
⚡ Travailler à λ_max (maximum d'absorption) pour une meilleure sensibilité et une meilleure linéarité de la réponse.
Courbe d'étalonnage — protocole
MéthodeMÉTHODE DE DOSAGE :
1. Préparer des solutions étalon c₁, c₂, c₃… (concentrations connues)
2. Mesurer A₁, A₂, A₃… pour chaque étalon à λ_max
3. Tracer A = f(c) → droite de pente (ε×l)
4. Mesurer A_inconnue de la solution à doser
5. Lire c_inconnue sur la droite (ou calculer c = A/(ε×l))
DROITE D'ÉTALONNAGE :
A = ε × l × c (passe par l'origine)
Pente = ε × l
CRITÈRES DE QUALITÉ :
• Coefficient de détermination R² ≥ 0,999
• Solution inconnue doit être dans la gamme d'étalonnage
• Blanc (solvant pur) mesuré en premier